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TwistDx恒温扩增应用

TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增（RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。

RPA反应的适宜温度在37℃~42℃之间，无需变性，常温下即可反应，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可检出水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。无需复杂样品处理，即可实地检测；既可扩增DNA也可扩增RNA，省去额外的cDNA合成步骤；检测方式多样：终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条（LFD）读取结果。

试剂盒包括两类：①.TwistAmp冻干研发试剂盒（包括TwistAmp Basic试剂盒、TwistAmp exo 试剂盒和TwistAmp nfo 试剂盒共三种）；②. TwistAmp液态研发试剂盒（包括TwistAmp Liquid Basic 试剂盒和TwistAmp Liquid exo 试剂盒共两种）

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如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。

TwistDx试剂盒

我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低，高的容易检测，低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍，达到可以检测出来的浓度。基本操作如下：

01  收集咽拭子等病毒样本，通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就没有了性，相对安全一些。

02  由于这次新冠是单链RNA病毒，所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式，同一个视频不同格式，意思都一样，可以互相转换。

03  常规PCR反应，加热到94℃把DNA拉链拉开，之后再55℃-60℃让引物，就是拉链扣分别套在两条拉链上，再升温到72℃让拉链自己，用左拉链做模板造一个右拉链，用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环，RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。

总检测，通过双抗原夹心检测总，既包含了IgM检测早期诊断新型冠状病毒的优势，又有检测IgG既往（包含处于恢复期IgM下降的患者）的特点，可以更好的防止漏检，缩短诊断窗口期，具有更高的特异性和灵敏度，同时节省操作时间和成本、方便快捷，减少交叉污染等优势，在新型冠状病毒检测中具有重要的价值！从已报道的新冠检测研发进展上来看，目前出现的检测IgM和IgG的方法主要是捕获法和间接法，而双抗原夹心的技术难度较高，常用来检测总。