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发布时间:2022-04-15 01:02:00 作者:立博泰业
突破传统桎梏,将分子检测带入一个新领域
如何将传统分子检测方法变的更加简单易懂、操作方便和快速***。一直是分子检测行业的一大课题。各个厂家和科研院所都在这方面投入了大量的时间和金钱。
安普未来有幸在该领域完成了突破和革新。在荧光检测领域,自主研发的MIRA技术将60分钟以上的核酸扩增阶段,缩短到20分钟。其开发了“核酸胶体金试纸条检测法”,可***抛弃掉高昂的检测设备,仅需配备简单的温控仪器即可(如金属浴、水浴锅等),甚至42°温水和利用人体温度亦可完成扩增反应,且核酸扩增时间进一步缩短到10分钟不到。其结果的准确率与传统PCR检测方式准确率一致。
具体操作方法如下:
1. 采用我司自主开发的快速核酸释放剂提取核酸(核酸释放剂与样本混匀,室温静置5分钟即可取上清作为核酸模板),或者采用市场常见“离心柱法”和“磁珠法”提取核酸作为模板亦可;
2. 取上述模板2μL加入到复融后的反应液中,通过上述各种加热手段,保证加热温度在37°~42°之间10分钟即可。
3. 上述反应时间结束后,向反应液中加入少许无菌水稀释,后直接插入试纸条,则马上可通过试纸条上的条带颜色变化,从而判定阴阳性。
自主研发用时,引物设计注意事项:
核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计:在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列;5’端修饰一个抗原标记(典型FAM);5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF);3’端标记一个修饰基团,如胺基、生物素或C3-Spacer,同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。
安普未来的解决方案操作十分简单
1核酸提取
直接取咽拭子等样品放入管A中(含裂解液,可灭活病毒);
管A放入95℃-100℃水浴或者金属浴10分钟;2扩增反应
向含有冻干试剂(冻干试剂包含了生物酶与各反应组分;可常温运输,便捷)的反应管中加入42.5 μL R buffer使其复溶;
取核酸提取步骤中提取完成的样本3-5μL 加入反应管;
然后在反应管加入2.5μL启动B buffer,盖上盖充分混匀后上机反应。反应温度为42℃,时长20min,实时显示荧光扩增曲线。其结果分析与荧光定量PCR类似,简单易懂。
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