TwistAmp Liquid exo代理商来电咨询「立博泰

TwistDx试剂盒

我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低，高的容易检测，低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍，达到可以检测出来的浓度。基本操作如下：

01  收集咽拭子等病毒样本，通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就没有了性，相对安全一些。

02  由于这次新冠是单链RNA病毒，所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式，同一个视频不同格式，意思都一样，可以互相转换。

03  常规PCR反应，加热到94℃把DNA拉链拉开，之后再55℃-60℃让引物，就是拉链扣分别套在两条拉链上，再升温到72℃让拉链自己，用左拉链做模板造一个右拉链，用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环，RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。

常见的是核酸检测试剂盒。一般多为qpcr方法的，也有多重pcr的。检测新型冠状病毒特异序列的方法常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高， Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

体外核酸扩增（NAA），遗传物质的人工，已经渗透到生命科学和生物技术的所有领域，如病原体检测、研究、、测序、基因工程、合成生物学、基因分型、诱变、法医鉴定、发现、分子考古学、食品检测、健康和生活方式检测等。这场性革命始于 Kary Mullis 于 1983 年发明的聚合酶链反应 (PCR)。通过提供有利于核酸过程（链变性、引物退火和酶促延伸）的连续温度，在体外将单个核酸分子到数十亿个拷贝。

RPA 作为颠覆 PCR 的革命性方法的突出地位源于其特定的反应成分（表 1）和机制。 对于成功的 RPA 分析，细微差别取决于内在因素、引物、探针和核酸模板的设计； 并且与外在因素有关，如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板DNA。 此外，RPA 过程中的核酸标记、RPA 扩增子纯化和扩增后处理也是 RPA 检测成功的重要细节。 本节提供从 RPA 文献中总结的这些实用信息，作为 RPA 检测设计的指南。