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PCR操作方法

这个方法很主流，也很经典。但是这个操作步骤太多，而且每次都是微量，手一抖就完蛋了。另外引物（就是拉链扣）的质量也是关键，如果错了拉链，那么整个检测前功尽弃。

当然还有机器清洗的问题，如果上一个阳性样本检测之后，没有洗干净设备，下一个本来阴性患者可能就会假阳性被误诊。中国大医院自己都有PCR检测仪器和人员，流程比较熟练。美国欧洲很多医院偏专科，综合性超大型少一些，本来很多检验都是委托外包第三方实验室。遇到疫情，着急出结果自己上手，可能有手法不纯熟的情况。如果又正好使用了某些中国的无证试剂盒厂商出品的无证试剂，多重误差叠加，准确度就会崩盘。

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增加分子数量使核酸的处理和后续应用更容易，减少了使用有毒性探针来跟踪分子存在的需求，并在应用方面产生了巨大的创造力。然而，尽管PCR很有价值 ，但是其需要复杂的热循环仪来提供循环加热和冷却过程，这在很大程度上限制了 PCR 在实验室内的实现，阻碍了其在资源匮乏环境中的应用。

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RPA 作为颠覆 PCR 的革命性方法的突出地位源于其特定的反应成分（表 1）和机制。 对于成功的 RPA 分析，细微差别取决于内在因素、引物、探针和核酸模板的设计； 并且与外在因素有关，如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板DNA。 此外，RPA 过程中的核酸标记、RPA 扩增子纯化和扩增后处理也是 RPA 检测成功的重要细节。 本节提供从 RPA 文献中总结的这些实用信息，作为 RPA 检测设计的指南。