安普未来价格服务至上「立博泰业」

自主研发用时，引物设计需注意！

核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计：在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列；5’端修饰一个抗原标记（典型FAM）;5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF)；3’端标记一个修饰基团，如胺基、生物素或C3-Spacer，同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。

该方法极其适用于现场核酸检测。可应用于初筛、食品安全、宠物疾病检测等各种不具备完整分子检测条件下的核酸测试。对操作人员***水平要求低，检测结果可信度高。

安普未来的解决方案操作十分简单

1核酸提取

直接取咽拭子等样品放入管A中（含裂解液，可灭活病毒）；

管A放入95℃-100℃水浴或者金属浴10分钟；2扩增反应

向含有冻干试剂（冻干试剂包含了生物酶与各反应组分；可常温运输，便捷）的反应管中加入42.5 μL R buffer使其复溶；

取核酸提取步骤中提取完成的样本3-5μL 加入反应管；

然后在反应管加入2.5μL启动B buffer，盖上盖充分混匀后上机反应。反应温度为42℃，时长20min，实时显示荧光扩增曲线。其结果分析与荧光定量PCR类似，简单易懂。

恒温快速扩增试剂盒操作步骤

提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1)    每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2)    每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针（引物和探针浓度为10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3)    向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为13.5 μL）；

4)    然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5)    混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins；

6)    反应结束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中，混合均匀后，将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡，5 mins内观察质控线与检测线判读结果。