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PCR革新技术-英国TwistDx Inc公司开发恒温扩增RPA

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术，目前***新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。

常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C - 42°C之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。

据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。

RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。

目前，TwistAmp? 试剂盒的扩增子长度在500bp以内。不过，经过特别优化的RPA扩增，也可以生成更长的扩增产物，或者减慢扩增速度(便于定量)，甚至在更低的温度下进行反应。

TwistDx恒温扩增应用

TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增（RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。

RPA反应的适宜温度在37℃~42℃之间，无需变性，常温下即可反应，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可检出水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。无需复杂样品处理，即可实地检测；既可扩增DNA也可扩增RNA，省去额外的cDNA合成步骤；检测方式多样：终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条（LFD）读取结果。

试剂盒包括两类：①.TwistAmp冻干研发试剂盒（包括TwistAmp Basic试剂盒、TwistAmp exo 试剂盒和TwistAmp nfo 试剂盒共三种）；②. TwistAmp液态研发试剂盒（包括TwistAmp Liquid Basic 试剂盒和TwistAmp Liquid exo 试剂盒共两种）

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TwistDx试剂盒

自 1983 年出现经典聚合酶链反应 (PCR) 方法以来，核酸扩增已渗透到生命科学的各个领域。 然而，尽管具有基本的影响，但 PCR 已被限制在实验室的范围内，因为它需要一套复杂的热循环系统，其限制了在资源匮乏环境中的外部应用。新的等温扩增策略正在寻求通过在恒温下提供核酸来突破传统的实验室限制。在这些方法中，重组酶聚合酶扩增 (RPA) 是发展快的方法之一，尽管它的开始相对较晚，但是却经历了快速的普及和市场化。