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TwistDx相关问题

1. RPA能实现多重化吗?

可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过，多重化的引物组合需要精心设计，以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是，RPA反应的引物总量(nmol)尽量不要超标太多。如果在-一个反应中使用两个以上的扩增引物，就应该控制不同引物的量。另外，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

2.能否对模板进行定量?

可以。扩增子达到可检出水平的时间，依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多，扩增子就越快达到可检出水平。不过，这种定量需要精心的实验安排，确保对照反应是同时开始的。举例来说，可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一一旦进入体系，RPA反应就会开始。此外，较慢的扩增过程有助于更***的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

3能否进行荧光终点分析?

可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。

4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?

支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

5跑胶前需要回收RPA产物吗?

需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。

即用型RPA检测试剂盒

客户采用RPA技术，可以根据自身需求开发自己的检测方法。在不同开发阶段所提供的这些即用型试剂盒内含有一整套用于检测主要食物病原体靶标的通用RPA试剂组分，灵活易用。

TwistDx公司曾经开发出系列即用型RPA检测试剂盒。例如，TwistAmp? exo +试剂盒为用户提供了一个exo试剂盒，加上用于实时荧光检测的引物探针及阳性模板，该模板可与每次检测反应配合使用。TwistGlow? 沙门氏菌（即用型，可用于实时荧光检测）和 TwistFlow? 沙门氏菌（即用型，可用于终点侧流检测）试剂盒均为用户提供包含靶基因及内部质控引物探针反应组分、一个两步走的细胞裂解样本制备方法，以及可与每次试剂盒反应配合使用的模板。

目前，TwistDx公司在被雅培收购后，停产了部分产品，包括：TwistAmp Basic RT试剂盒、TwistAmp exo RT试剂盒、TwistAmp Liquid Basic RT 试剂盒和TwistAmp Liquid exo RT试剂盒、食品安全试剂盒（包括TwistAmp exo 弯曲菌属检测试剂盒（TwistAmp exo +Campylobacter）、TwistAmp exo 单核细胞***李斯特菌检测试剂盒（TwistAmp exo +ListeriaM）、TwistGlow?沙门氏菌检测试剂盒（TwistGlow?Salmonella）和TwistFlow 沙门氏菌检测试剂盒（TwistFlow?Salmonella ）共四种）。

TwistDx的未来

RPA核酸检测技术被誉为可替代PCR的犀利单分子检验技术，因为其灵敏，快速，对设备要求低，操作简易等特点。自其被开发出来之后，-直被广大科研工作者津津乐道。2009年，***较大种子公司孟山都与TwistDx公司合作进行***作物快速检测项目，旨在提高******作物移交转让效率。近年来TwistDx根据RPA检测特点， 通过在基础体系中填加不同酶和探针，开发出多款研发型和实用型检测产品，以实现多样化的RPA应用。