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发布时间:2022-05-01 04:15:00 作者:立博泰业
RPA与LAMP对比
LAMP:环介导等温扩增法的特征是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。
RPA:主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。
如何提高扩增曲线的可重复性?
A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板,不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同(未混匀的反应扩增效率不佳)。另外,在低温情况下存贮,重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以,20x主要反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体,不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足,在加入体系前,用户必须保证震荡后20x主要反应组分均一。
TwistDx试剂盒
DNA检测的原理是聚合酶链式反应(PCR)。如果你了病毒,那么应该能检测到病毒的核酸,我们可以利用体外DNA扩增的方式扩增这些核酸并检测。PCR就是一种体外DNA扩增的技术,简单来说就是可以让特定的DNA分子一条链变两条链,两条变四条,四条变八条,每个循环翻一倍。然后通过看经过多少个循环这个DNA分子的数量超过阈值,就可以计算原本样品中DNA的量(也就是说每少一个循环超过阈值说明病毒核酸的量多一倍)。一个30循环的PCR反应大概需要两小时。算上样品处理等时间应该会在四到五个小时左右,如果要等其他人一起做则更久。
TwistDx试剂盒概述
体外核酸扩增(NAA),遗传物质的人工,已经渗透到生命科学和生物技术的所有领域,如病原体检测、研究、、测序、基因工程、合成生物学、基因分型、诱变、法医鉴定、发现、分子考古学、食品检测、健康和生活方式检测等。这场性革命始于 Kary Mullis 于 1983 年发明的聚合酶链反应 (PCR)。通过提供有利于核酸过程(链变性、引物退火和酶促延伸)的连续温度,在体外将单个核酸分子到数十亿个拷贝。
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