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恒温快速扩增试剂盒应在怎样的温度下使用？

标准的ERA扩增试剂盒经过配制可在37℃-42℃的温度范围内操作。过高的温度会对反应体系产生不利的影响，因为酶会逐渐地失去全部活性。对于RT试剂盒，我们建议客户在40℃下运行反应，因为逆转录酶在稍高温度下具有更高的活性。

立博泰业——多年销售恒温快速扩增试剂盒，我们公司坚持用户为上帝，想用户之所想，急用户之所急，以诚为本，讲求信誉，以产品求发展，以质量求生存，我们热诚地欢迎各位同仁合作共创辉煌。

恒温扩增试剂盒产品特点

产品特点:

1.高特异性,由于同时使用4-6条特异引物,所以特异性比RT-PCR更高。

2.高扩增效率,扩增效率可达到10E9-10E10,比PCR灵敏一个数量级,可检测到单拷贝的RNA分子

3. 65℃左右完成RT和LAMP扩增,不需要贵重的热循环仪。

4. 即开即用,包含了除引物和模板RNA外的所有成份,十分方便。

5. 肉眼检测扩增结果,不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。

6. 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。

恒温快速扩增试剂盒常用酶原料

尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时，可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键，而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能，但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被UDG有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率，因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。