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发布时间:2022-06-13 04:50:00 作者:立博泰业
恒温快速扩增试剂盒出现假阳性的结果,可能的原因有哪些?
如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增试剂(溶解剂等)。可能需要重复几次清洁,才能完全清除污染。
恒温扩增常用酶
恒温扩增的方法多种多样,其对应的酶体系也各有差别,且一般为多酶体系,在酶原料选择上相比PCR复杂,下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶,详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能;若检测模板为RNA,则可加入逆转录酶配制成RT-LAMP反应体系。
恒温扩增试剂盒有哪些常用酶
TMA相关酶
依赖转录介导扩增(Transcription mediated amplification, TMA)的扩增模板为RNA或单链DNA,检测的扩增产物为RNA,详细原理可参考转录介导的核酸扩增技术小结。该体系所用酶有两种:M-MLV逆转录酶:用于模板RNA逆转录成DNA,并在逆转录过程中通过引物引入转录启动子序列,用于后续转录过程;T7 RNA聚合酶:以逆转录形成的DNA为模板,转录合成检测产物RNA。
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