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PCR革新技术-英国TwistDx Inc公司开发恒温扩增RPA

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术，目前新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。

常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C - 42°C之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。

据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。

RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。

目前，TwistAmp? 试剂盒的扩增子长度在500bp以内。不过，经过特别优化的RPA扩增，也可以生成更长的扩增产物，或者减慢扩增速度(便于定量)，甚至在更低的温度下进行反应。

恒温扩增技术

应用领域:广泛应用于临床诊断，食品安全检测，动物疾病检测等领域

技术特点:快速，特异，无需专门设备

类型:取代PCR的恒温核酸扩增技术，目前有应用前景的就是RPA技术，此外也有一些其他恒温扩增技术，主要包括：

1. 滚环核酸扩增( rolling circle amolification，RCA )

2.环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification，LAMP)

3.链替代扩增

4.依赖核酸序列扩增( nucleicacid sequence based amplification ，NASBA)

5.解链酶扩增( helix dependent amplification， HAD)

TwistDx试剂盒

蛋白质检测的原理很简单，就是抗原结合。一个更常用的例子就是验孕棒。快筛基本都是用的这个，如果你了，显然你就应该会有病毒特异性的蛋白质，你的身体也会针对这种病毒产生（的本质也是蛋白质），蛋白质检测就是利用这点，检测这些蛋白质是否存在。有些检验的是血液，有些检验的是鼻腔之类的不一而足，但总的来说抗原结合是非常快的，理论上数分钟到数十分钟内就可以看到结果。

自 1983 年出现经典聚合酶链反应 (PCR) 方法以来，核酸扩增已渗透到生命科学的各个领域。 然而，尽管具有基本的影响，但 PCR 已被限制在实验室的范围内，因为它需要一套复杂的热循环系统，其限制了在资源匮乏环境中的外部应用。新的等温扩增策略正在寻求通过在恒温下提供核酸来突破传统的实验室限制。在这些方法中，重组酶聚合酶扩增 (RPA) 是发展快的方法之一，尽管它的开始相对较晚，但是却经历了快速的普及和市场化。