天津试纸条型恒温扩增试剂盒批发服务介绍「在线咨询」

恒温快速扩增试剂盒出现假阳性的结果，可能的原因有哪些？

如果在无模板对照中观察到假阳性结果，则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时，必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染，我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒，并使用新的扩增试剂（溶解剂等）。可能需要重复几次清洁，才能完全清除污染。

恒温快速扩增试剂盒常用酶原料

尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时，可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键，而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能，但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被UDG有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率，因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。

恒温扩增试剂盒常用酶简介

RPA相关酶

重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，定位至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助DNA解链，以便启动扩增；单链DNA结合蛋白：可与被置换出的DNA单链结合，稳定单链结构；DNA聚合酶：如Bsu DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。对于RNA模板，需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系；若利用标记探针进行检测，还需加入核酸酶对探针序列进行切割，常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV, nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III, exo)，或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。

恒温扩增试剂盒操作步骤

提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化。鹿荡混匀。

1).每个干粉反应管加入29.4 uL Abuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 uLAbuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响) ;

2.每个反应管分别加入2 uL上游引物、2 uL下游引物和0.6 μ探针(引物和探针浓度为10 μM ,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)