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发布时间:2022-07-28 14:03:00 作者:立博泰业
RPA技术的基本原理
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针,就可以实现多样化的RPA应用。举例来说,TwistAmp? exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III,能实现数据的实时读取,就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来,可以一步实现RNA模板的实时扩增。
RPA 的概念
概念:重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。
TwistDx的未来
RPA核酸检测技术被誉为可替代PCR的犀利单分子检验技术,因为其灵敏,快速,对设备要求低,操作简易等特点。自其被开发出来之后,-直被广大科研工作者津津乐道。2009年,较大种子公司孟山都与TwistDx公司合作进行作物快速检测项目,旨在提高作物移交转让效率。近年来TwistDx根据RPA检测特点, 通过在基础体系中填加不同酶和探针,开发出多款研发型和实用型检测产品,以实现多样化的RPA应用。
TwistDx试剂盒介绍
我们通过对已发表文献的数据挖掘总结了关键的 RPA 实验技巧和问题,以帮助研究人员掌握 RPA 反应。我们还概述了 RPA 发展的有影响力的热点,并总结了对未来发展的展望以及对超过PCR和进一步革新生命科学的影响。
立博泰业——多年销售TwistDx试剂盒产品,我们公司坚持用户为上帝,想用户之所想,急用户之所急,以诚为本,讲求信誉,以产品求发展,以质量求生存,我们热诚地欢迎各位同仁合作共创辉煌。
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