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恒温快速扩增试剂盒常用酶原料有哪些？

逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种RNA介导的DNA聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA, cDNA)，形成RNA:cDNA杂交链；发挥RNase H活性，降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板；以cDNA作为模板合成第二链DNA，形成双链DNA（如下图）。其中，RNaseH活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割RNA:cDNA杂合链中的RNA模板，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无RNase H活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有AMV和M-MLV，AMV分离自禽类成髓细胞瘤病毒(Avian Myeloblastosis Virus, AMV)，M-MLV逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(Moloney Murine Leukemia Virus, MMLV)，前者热稳定性优于后者，但AMV逆转录酶的RNaseH活性也更强，不利于长片段cDNA合成。市面上多使用经基因工程改造过的M-MLV逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时RNase H活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。

恒温扩增常用酶

恒温扩增的方法多种多样，其对应的酶体系也各有差别，且一般为多酶体系，在酶原料选择上相比PCR复杂，下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。

LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶，详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能；若检测模板为RNA，则可加入逆转录酶配制成RT-LAMP反应体系。

恒温扩增试剂盒常用酶简介

RPA相关酶

重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，定位至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助DNA解链，以便启动扩增；单链DNA结合蛋白：可与被置换出的DNA单链结合，稳定单链结构；DNA聚合酶：如Bsu DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。对于RNA模板，需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系；若利用标记探针进行检测，还需加入核酸酶对探针序列进行切割，常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV, nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III, exo)，或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。