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发布时间:2023-05-12 08:34:00 作者:立博泰业
恒温快速扩增试剂盒应在怎样的温度下使用?
标准的ERA扩增试剂盒经过配制可在37℃-42℃的温度范围内操作。过高的温度会对反应体系产生不利的影响,因为酶会逐渐地失去全部活性。对于RT试剂盒,我们建议客户在40℃下运行反应,因为逆转录酶在稍高温度下具有更高的活性。
立博泰业——多年销售恒温快速扩增试剂盒,我们公司坚持用户为上帝,想用户之所想,急用户之所急,以诚为本,讲求信誉,以产品求发展,以质量求生存,我们热诚地欢迎各位同仁合作共创辉煌。
恒温扩增试剂盒
原理概述:
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在恒温条件下(42 °C),特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。
产品特点:
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需30 mins)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买PCR扩增仪等价格高昂的专属设备。
恒温快速扩增试剂盒出现假阳性的结果,可能的原因有哪些?
如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增试剂(溶解剂等)。可能需要重复几次清洁,才能完全清除污染。
恒温快速扩增试剂盒常用酶原料有哪些?
逆转录酶逆转录酶又称反转录酶,是一种RNA介导的DNA聚合酶,其反应过程中体现出三种功能为:以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA, cDNA),形成RNA:cDNA杂交链;发挥RNase H活性,降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板;以cDNA作为模板合成第二链DNA,形成双链DNA(如下图)。其中,RNaseH活性是逆转录酶的一个内在特性,可在合成过程中同时切割RNA:cDNA杂合链中的RNA模板,该特性可能降低逆转录效率,因此在实际应用中,常采用人工改造后的低或无RNase H活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有AMV和M-MLV,AMV分离自禽类成髓细胞瘤病毒(Avian Myeloblastosis Virus, AMV),M-MLV逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(Moloney Murine Leukemia Virus, MMLV),前者热稳定性优于后者,但AMV逆转录酶的RNaseH活性也更强,不利于长片段cDNA合成。市面上多使用经基因工程改造过的M-MLV逆转录酶,其热稳定性改进,可在50℃左右工作,同时RNase H活性进一步减弱,提高了其逆转录效率。
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