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恒温快速扩增试剂盒的操作简单

首先：核酸提取

1. 取样放入管A中; （管A中核酸释放液，能灭活病毒）

2. 管A放入95℃-100℃10分钟（原理是核酸释放液中酶失活，但是能进一步灭活病毒）；

第二步：扩增反应

3. 直接向管中的干粉试剂加如buffer 1使其变成液态；

4. 向8连管管盖上滴上buferr 2（高粘度不会轻易脱落）以备用。

5. 取管A中液体5ul加入8连管内。后盖盖。之后直接上机即可。20min后机器实时显示结果。

注：可采用我司的荧光检测设备。WL-1601（16孔荧光检测仪）

亦可采用市面上咋销售的各类荧光定量qPCR仪。均可实现20min内完成检测的效果。

其结果分析跟荧光定量PCR基本相同，亦有实施荧光S型曲线，简单易懂。

我司不仅针对自己的设备配有详细的操作说明，针对其他品牌的设备也匹配了相应的条件设置SOP或短视频，以便客户拿到试剂产品后，可在几分钟内掌握检测方法。

（荧光定量PCR检测结果）

（安普未来荧光检测仪结果）

使用该技术方案，如果3名检测人员同时工作，一天8个小时可完成1400份以上的样本检测。大幅提升检测效率，且对检测环境以及设备要求不高。

安普未来生物 MIRA 助力新冠疫情***！

新型冠状病毒现在准确的确诊方法是核酸检测，但传统的荧光定量PCR方法需要采取病毒提取、反转录、荧光定量扩增等多步操作，完成整个检测实验长达3小时以上。并且该病毒有可能通过气溶胶传播，实验中病毒的核酸提取过程需要多步骤处理标本，操作复杂，检测人员被染的风险几率高。为了很快控制住疫情，我们迫切需要一种更安全、简便、快速的检测方法，这就是安普未来的新型冠状病毒恒温快速检测方法。

潍坊安普未来生物科技有限公司创业团队，历经十年自主研发出多酶恒温快速扩增(即Multienzyme Isothermal Rapid Amplification ，以下简称MIRA)技术，这是一种恒温核酸快速扩增技术，依靠多种功能蛋白在常温下完成核酸的快速扩增，可替代目前的聚合酶链反应 (PCR)技术。

除了前述的胶体金跨速核酸检测法以外，公司还具备荧光型检测方法。结合本公司所***的超快速核酸提取试剂（5分钟提取DNA/RNA用于扩增）和荧光检测仪，可将整个核酸检测实验的全部时间缩短至8至20分钟内完成。

恒温快速扩增试剂盒原理概述

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩 增技术:在常温恒温条件下，重组酶和引物形成蛋白单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下，侵入双链DNA模板，在侵入位点形成D-loop区域，并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引|物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时，聚合酶也结合到引|物的3'末端，开始链的延伸。本试剂盒在39。C下，依赖核酸外切酶的作用，加入根据模版设计的特异的分子探针，使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。

恒温快速扩增试剂盒操作步骤

提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1)    每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2)    每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针（引物和探针浓度为10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3)    向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为13.5 μL）；

4)    然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5)    混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins；

6)    反应结束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中，混合均匀后，将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡，5 mins内观察质控线与检测线判读结果。