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RPA 的概念

概念：重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

RPA的特性

1. 快速检测15min进行单分子检测试验

2.简易包装稳定冻干形式试剂

3. 无需热循环过程摆脱任何仪器束缚

4.便携设备要求低，贫瘠条件亦能完成检测

立博泰业 ——***供应TwistDx试剂盒，我们公司坚持用户为上帝，想用户之所想，急用户之所急，以诚为本，讲求信誉，以产品求发展，以质量求生存，我们热诚地欢迎各位同仁合作共创辉煌。

TwistDx相关问题

1. RPA能实现多重化吗?

可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过，多重化的引物组合需要精心设计，以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是，RPA反应的引物总量(nmol)尽量不要超标太多。如果在-一个反应中使用两个以上的扩增引物，就应该控制不同引物的量。另外，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

2.能否对模板进行定量?

可以。扩增子达到可检出水平的时间，依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多，扩增子就越快达到可检出水平。不过，这种定量需要精心的实验安排，确保对照反应是同时开始的。举例来说，可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一一旦进入体系，RPA反应就会开始。此外，较慢的扩增过程有助于更***的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

3能否进行荧光终点分析?

可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。

4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?

支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

5跑胶前需要回收RPA产物吗?

需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。

TwistDx试剂盒

至关重要的是，RPA 的技术增强了实验室外高度可访问和灵敏的核酸扩增，甚至是自我测试。在这里，我们回顾了 RPA 在其个十年发展过程中的无需设备的简单性。我们的综述包括 RPA 技术的关键知识，例如其反应成分、机制、灵敏度和特异性以及的检测方法。该综述还提供了开发 RPA 分析的专有技术，以及有关市售 RPA 反应试剂盒和附件的信息。