TwistAmp nfo公司***「多图」

如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。

RPA是什么？

自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。

TwistDx试剂盒

等温核酸扩增的新进展为人工核酸提供了简化的孵育条件，只需要恒温而不是热循环。单一温度培养降低了设备要求，开辟了突破实验室界限并在资源匮乏环境中进行扩增的新途径。通过减少扩增时间，消除重复的加热和冷却步骤还为低资源实施提供了第二个优势。更快的反应发生不仅因为加热和冷却时间的减少，而且因为多个分子反应可以异步进行，而不是在人工加热和冷却循环中顺序操作。自 1990 年代初以来，大量的等温核酸扩增方法采用了各种反应机制。

RPA 作为颠覆 PCR 的革命性方法的突出地位源于其特定的反应成分（表 1）和机制。 对于成功的 RPA 分析，细微差别取决于内在因素、引物、探针和核酸模板的设计； 并且与外在因素有关，如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板DNA。 此外，RPA 过程中的核酸标记、RPA 扩增子纯化和扩增后处理也是 RPA 检测成功的重要细节。 本节提供从 RPA 文献中总结的这些实用信息，作为 RPA 检测设计的指南。