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多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用

————MIRA助力猪疫病的检测

2018年10月开始的非洲猪疫情，很大的冲击了中国生猪养殖市场和屠宰市场。造成了市场格局的大幅变化，也提升了***和民众对畜牧养殖的认识和重视，从简单的关注食品安全开始向关注食材原料安全转移。随着疫情的逐渐缓和，疫情的检测主体已经从生猪检测向环境监控转化。例如，厂区周边取样、运送生猪的车辆取样、进出人员的衣物取样等。这些预防性检测已占据养殖场日常检测量的80%以上，因此对养殖过程中诊断提出了更高的要求，需要便携、快捷、易操作、便于临场检测的新技术，而传统PCR检测技术存在检测时间长、人员技术要求高和设备昂贵等特点，在实际应用上，越来越不适合畜牧养殖等非***区域的检测需求。而我司的MIRA技术恰恰可以弥补上述缺陷。MIRA多酶恒温快速扩增技术，模仿细胞内核酸过程，在体外、常温、恒温的状态下实现核酸的指数式扩增。其***就是利用多酶系统替代以往利用精密温控设备（PCR仪）才能完成的变性、退火、延伸等流程。

恒温快速扩增试剂盒操作步骤

提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1)    每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2)    每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针（引物和探针浓度为10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3)    向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为13.5 μL）；

4)    然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5)    混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins；

6)    反应结束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中，混合均匀后，将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡，5 mins内观察质控线与检测线判读结果。

恒温快速扩增试剂盒注意事项：

1．  由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免微量核酸污染，并尽量考虑设置空白对照以确认是否有核酸污染。

2．  试剂盒保质期12个月。每次使用时，请取出实验所需的MIRA反应单元的数量，置于冰浴条件下并在8小时内使用；剩余部分，请置于存储条件下。

立博泰业本着多年恒温快速扩增试剂盒行业经验，专注恒温快速扩增试剂盒研发定制与生产，***的恒温快速扩增试剂盒生产设备和技术，建立了严格的产品生产体系，想要更多的了解，欢迎咨询图片上的热线电话！！！

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组织细胞主要包括衣原体、病毒和立克次体等，由于不同的病原体内的组织细胞种类不同，所以从病原微生物中取出组织细后需采用传代培养的方式进行的培养，进而再讲培养的病原微生物接种到组织细胞中进行培养，以尽可能的减少细胞的病变。此外，也可以在培养组织细胞的过程中，可以将病原微生物直接在敏感动物体内接种，再根据动物的组织出现的改变对病原体的特质进行检验。