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TwistDx相关问题

1. RPA能实现多重化吗?

可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过，多重化的引物组合需要精心设计，以便每个引物都能同样有效的工作。需要注意的是，RPA反应的引物总量(nmol)尽量不要超标太多。如果在-一个反应中使用两个以上的扩增引物，就应该控制不同引物的量。另外，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

2.能否对模板进行定量?

可以。扩增子达到可检出水平的时间，依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多，扩增子就越快达到可检出水平。不过，这种定量需要精心的实验安排，确保对照反应是同时开始的。举例来说，可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一一旦进入体系，RPA反应就会开始。此外，较慢的扩增过程有助于更***的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

3能否进行荧光终点分析?

可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。

4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?

支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

5跑胶前需要回收RPA产物吗?

需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。

TwistDx试剂盒

先说结论:目前的检测仍重度依赖核酸检测(以PCR技术为主)，检测速度较慢(大  部分需要2小时以上)，成本较高，且需要经训练的医护或实验人员来操控设备，因此无法实  现大规模快速检测。其他已商业化的快速检测试剂盒绝大多数依靠检测(IgG/lgM),可在10-  20分钟内获取检测结果，成本较低，操作简单，但是准确性较差，有较大的概率出现假阳性与假阴  性的情况，因此仅适用于大量地区粗略统计人数以及比例，或作为核酸检测的辅助指  标，其检测结果无法作为确定检测者与否的决定性指标，而目前能实现快速检测(10-20分  钟)且确保准确性的方法之一抗原检测，尚未有成熟的产品面世，仅有少数科技公司宣称近完成了产品开发。此外，基于CRISPR的检测技术的试剂盒可以为认为是核酸检测技术与检测  技术的一个折中，准确性高，速度较快，成本较低且操作简单，但由于技术相对新  颖，只有少数公司与研究机构完成了试剂盒的开发，产品尚未大规模推广。

DNA检测的原理是聚合酶链式反应（PCR）。如果你了病毒，那么应该能检测到病毒的核酸，我们可以利用体外DNA扩增的方式扩增这些核酸并检测。PCR就是一种体外DNA扩增的技术，简单来说就是可以让特定的DNA分子一条链变两条链，两条变四条，四条变八条，每个循环翻一倍。然后通过看经过多少个循环这个DNA分子的数量超过阈值，就可以计算原本样品中DNA的量（也就是说每少一个循环超过阈值说明病毒核酸的量多一倍）。一个30循环的PCR反应大概需要两小时。算上样品处理等时间应该会在四到五个小时左右，如果要等其他人一起做则更久。