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发布时间:2022-02-07 09:19:00 作者:立博泰业
TwistDx试剂盒
2018年,TwistDx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)试剂盒,这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。
TwistAmp??Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂,该形态对于在实验室执行 PCR 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中,用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积,配制用于多次反应的预混液,或者以各种 RPA 组分比例进行实验以优化试验。
除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp? RPA试剂盒这一旗舰产品,本次新推出的?TwistAmp? Liquid试剂盒是现场试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法(该方法有时甚至采用与PCR相同的引物)取代 PCR法,以及更容易地开发出定制的试验。
我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低,高的容易检测,低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍,达到可以检测出来的浓度。基本操作如下:
01 收集咽拭子等病毒样本,通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子,萃取病毒RNA。一方面是萃取,另一反面,打碎之后就没有了性,相对安全一些。
02 由于这次新冠是单链RNA病毒,所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式,同一个视频不同格式,意思都一样,可以互相转换。
03 常规PCR反应,加热到94℃把DNA拉链拉开,之后再55℃-60℃让引物,就是拉链扣分别套在两条拉链上,再升温到72℃让拉链自己,用左拉链做模板造一个右拉链,用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环,RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。
RPA技术
01 特别快,传统PCR要45分钟,因为要反复升温降温。RPA由于是恒温,所以只需要3-10分钟。
02 灵敏度高,因为是高度定向扩增,所以样品即便有点儿杂质也OK,免除了前处理环节,尽量多的保留了样本。
03 温度控制要求低,一般是加热到40℃,但是在紧急情况下,贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃,也是可以运行,就是慢点儿,要等一个小时而已。
04 适用性强,面对RNA病毒,直接在试剂里加入逆转录酶就好,一锅端。
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自 1983 年出现经典聚合酶链反应 (PCR) 方法以来,核酸扩增已渗透到生命科学的各个领域。 然而,尽管具有基本的影响,但 PCR 已被限制在实验室的范围内,因为它需要一套复杂的热循环系统,其限制了在资源匮乏环境中的外部应用。新的等温扩增策略正在寻求通过在恒温下提供核酸来突破传统的实验室限制。在这些方法中,重组酶聚合酶扩增 (RPA) 是发展快的方法之一,尽管它的开始相对较晚,但是却经历了快速的普及和市场化。
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