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发布时间：2022-02-16 06:23:00 作者：立博泰业
TwistDx
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。
等温扩增技术的基因快速诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂快速检测病原微生物的一种技术。
包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基因数据库的建立;生物信息学的分析比较;基因组多态性的分型处理和简并碱基的运用,获得各种靶基因的特异性引物两对,分别与靶基因中的六个独立区域序列特异性匹配;三、进行等温扩增反应;四、分析判断结果。该方法的优点:不需特殊试剂与设备;高特异性;.灵敏度高;鉴定简便;用途广: 可用于食品、药品、化妆品等领域的质量控制和环境、水质等监测;用于医学临床诊断,用于代谢性疾病和遗传疾病的基因诊断。
如何提高扩增曲线的可重复性?
A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。
TwistDx Inc. 由分子生物学家兼蛋白生物化学家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同创立，其总部位于英国马萨诸塞州剑桥市。TwistDx Limited 于 2002 年成立，其运营设施位于英国剑桥。
我们的愿景：TwistDx 希望将 RPA 分子检验和技术普及到所有可应用领域，使科学家和技术开发人员不再受到高温 DNA 扩增技术的束缚。
PCR操作方法
这个方法很主流，也很经典。但是这个操作步骤太多，而且每次都是微量，手一抖就完蛋了。另外引物（就是拉链扣）的质量也是关键，如果错了拉链，那么整个检测前功尽弃。
当然还有机器清洗的问题，如果上一个阳性样本检测之后，没有洗干净设备，下一个本来阴性患者可能就会假阳性被误诊。中国大医院自己都有PCR检测仪器和人员，流程比较熟练。美国欧洲很多医院偏专科，综合性超大型少一些，本来很多检验都是委托外包第三方实验室。遇到疫情，着急出结果自己上手，可能有手法不纯熟的情况。如果又正好使用了某些中国的无证试剂盒厂商出品的无证试剂，多重误差叠加，准确度就会崩盘。
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