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发布时间:2022-02-24 04:31:00 作者:立博泰业
RPA与LAMP对比
LAMP:环介导等温扩增法的特征是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。
RPA:主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。
TwistDx试剂盒
我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低,高的容易检测,低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍,达到可以检测出来的浓度。基本操作如下:
01 收集咽拭子等病毒样本,通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子,萃取病毒RNA。一方面是萃取,另一反面,打碎之后就没有了性,相对安全一些。
02 由于这次新冠是单链RNA病毒,所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式,同一个视频不同格式,意思都一样,可以互相转换。
03 常规PCR反应,加热到94℃把DNA拉链拉开,之后再55℃-60℃让引物,就是拉链扣分别套在两条拉链上,再升温到72℃让拉链自己,用左拉链做模板造一个右拉链,用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环,RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。
等温核酸扩增的新进展为人工核酸提供了简化的孵育条件,只需要恒温而不是热循环。单一温度培养降低了设备要求,开辟了突破实验室界限并在资源匮乏环境中进行扩增的新途径。通过减少扩增时间,消除重复的加热和冷却步骤还为低资源实施提供了第二个优势。更快的反应发生不仅因为加热和冷却时间的减少,而且因为多个分子反应可以异步进行,而不是在人工加热和冷却循环中顺序操作。自 1990 年代初以来,大量的等温核酸扩增方法采用了各种反应机制。
自 1990 年代初以来,大量的等温核酸扩增方法采用了各种反应机制。成熟的方法是基于核酸序列的扩增(NASBA,也称为转录介导的扩增,TMA)、核糖核酸(RNA)技术的信号介导扩增(SMART)、解旋酶依赖性扩增(HDA) 、重组酶聚合酶扩增(RPA)、滚环扩增(RCA)、多重置换扩增(MDA)、环介导等温扩增(LAMP)和链置换扩增(SDA);
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