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发布时间：2022-02-26 05:12:00 作者：立博泰业
RPA 的概念
概念：重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。
PCR操作方法
这个方法很主流，也很经典。但是这个操作步骤太多，而且每次都是微量，手一抖就完蛋了。另外引物（就是拉链扣）的质量也是关键，如果错了拉链，那么整个检测前功尽弃。
当然还有机器清洗的问题，如果上一个阳性样本检测之后，没有洗干净设备，下一个本来阴性患者可能就会假阳性被误诊。中国大医院自己都有PCR检测仪器和人员，流程比较熟练。美国欧洲很多医院偏专科，综合性超大型少一些，本来很多检验都是委托外包第三方实验室。遇到疫情，着急出结果自己上手，可能有手法不纯熟的情况。如果又正好使用了某些中国的无证试剂盒厂商出品的无证试剂，多重误差叠加，准确度就会崩盘。
RPA技术
01 特别快，传统PCR要45分钟，因为要反复升温降温。RPA由于是恒温，所以只需要3-10分钟。
02 灵敏度高，因为是高度定向扩增，所以样品即便有点儿杂质也OK，免除了前处理环节，尽量多的保留了样本。
03 温度控制要求低，一般是加热到40℃，但是在紧急情况下，贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃，也是可以运行，就是慢点儿，要等一个小时而已。
04 适用性强，面对RNA病毒，直接在试剂里加入逆转录酶就好，一锅端。
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TwistDx试剂盒
自 1990 年代初以来，大量的等温核酸扩增方法采用了各种反应机制。成熟的方法是基于核酸序列的扩增（NASBA，也称为转录介导的扩增，TMA）、核糖核酸（RNA）技术的信号介导扩增（SMART）、解旋酶依赖性扩增（HDA） 、重组酶聚合酶扩增（RPA）、滚环扩增（RCA）、多重置换扩增（MDA）、环介导等温扩增（LAMP）和链置换扩增（SDA）；
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