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RPA技术的基本原理

RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp? exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。

RPA是什么？

自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。

RPA技术

01  特别快，传统PCR要45分钟，因为要反复升温降温。RPA由于是恒温，所以只需要3-10分钟。

02  灵敏度高，因为是高度定向扩增，所以样品即便有点儿杂质也OK，免除了前处理环节，尽量多的保留了样本。

03  温度控制要求低，一般是加热到40℃，但是在紧急情况下，贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃，也是可以运行，就是慢点儿，要等一个小时而已。

04  适用性强，面对RNA病毒，直接在试剂里加入逆转录酶就好，一锅端。

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TwistDx试剂盒

DNA检测的原理是聚合酶链式反应（PCR）。如果你了病毒，那么应该能检测到病毒的核酸，我们可以利用体外DNA扩增的方式扩增这些核酸并检测。PCR就是一种体外DNA扩增的技术，简单来说就是可以让特定的DNA分子一条链变两条链，两条变四条，四条变八条，每个循环翻一倍。然后通过看经过多少个循环这个DNA分子的数量超过阈值，就可以计算原本样品中DNA的量（也就是说每少一个循环超过阈值说明病毒核酸的量多一倍）。一个30循环的PCR反应大概需要两小时。算上样品处理等时间应该会在四到五个小时左右，如果要等其他人一起做则更久。