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重组酶介导等温核酸扩增技术原理

RAA技术 是重组酶介导等温核酸扩增技术（Recombinase Aided Amplification）的简称，是一种利用重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶在等温条件下（佳温度37℃）进行核酸扩增的技术。具体原理为：重组酶、单链结合蛋白、引物形成复合体扫描双链DNA，在与引物同源的序列处使双链DNA解旋，单链结合蛋白（SSB）防止单链DNA复性，在能量和dNTP存在的情况下，由DNA聚合酶完成链的延伸，5-20分钟就可实现仪器扩增。

TwistDx试剂盒

我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低，高的容易检测，低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍，达到可以检测出来的浓度。基本操作如下：

01  收集咽拭子等病毒样本，通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就没有了性，相对安全一些。

02  由于这次新冠是单链RNA病毒，所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式，同一个视频不同格式，意思都一样，可以互相转换。

03  常规PCR反应，加热到94℃把DNA拉链拉开，之后再55℃-60℃让引物，就是拉链扣分别套在两条拉链上，再升温到72℃让拉链自己，用左拉链做模板造一个右拉链，用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环，RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。

先说结论:目前的检测仍重度依赖核酸检测(以PCR技术为主)，检测速度较慢(大  部分需要2小时以上)，成本较高，且需要经训练的医护或实验人员来操控设备，因此无法实  现大规模快速检测。其他已商业化的快速检测试剂盒绝大多数依靠检测(IgG/lgM),可在10-  20分钟内获取检测结果，成本较低，操作简单，但是准确性较差，有较大的概率出现假阳性与假阴  性的情况，因此仅适用于大量地区粗略统计人数以及比例，或作为核酸检测的辅助指  标，其检测结果无法作为确定检测者与否的决定性指标，而目前能实现快速检测(10-20分  钟)且确保准确性的方法之一抗原检测，尚未有成熟的产品面世，仅有少数科技公司宣称近完成了产品开发。此外，基于CRISPR的检测技术的试剂盒可以为认为是核酸检测技术与检测  技术的一个折中，准确性高，速度较快，成本较低且操作简单，但由于技术相对新  颖，只有少数公司与研究机构完成了试剂盒的开发，产品尚未大规模推广。