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RPA技术的基本原理

RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp? exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。

TwistDx试剂盒

2018年，TwistDx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。

TwistAmp??Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行 PCR 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种 RPA 组分比例进行实验以优化试验。

除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp? RPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的?TwistAmp? Liquid试剂盒是现场试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的引物）取代 PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。

我们通过对已发表文献的数据挖掘总结了关键的 RPA 实验技巧和问题，以帮助研究人员掌握 RPA 反应。我们还概述了 RPA 发展的有影响力的热点，并总结了对未来发展的展望以及对超过PCR和进一步革新生命科学的影响。

 立博泰业——专注研究、销售TwistDx试剂盒产品，我们公司坚持用户为上帝，想用户之所想，急用户之所急，以诚为本，讲求信誉，以产品求发展，以质量求生存，我们热诚地欢迎各位同仁合作共创辉煌。

RPA 于 2006 年由 ASM Scientific Ltd（英国剑桥，由 Wellcome Trust Sanger Institute 创立）的 Niall Armes 推出。虽然RPA在等温核酸扩增技术中还没有占据很大的市场份额（根据Grand View Research报告的数据，图1A），但它正在经历着快速的发展。迄今为止，已经发表了 250 多篇有关 RPA 的出版物，并且在过去六年中 RPA 的文献数量一直在增加；值得注意的是，RPA 文献数量从 2014 年开始呈指数增长。