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发布时间:2022-03-13 04:52:00 作者:立博泰业
试剂盒有以下三大特点:
1、快速,操作简便,从样品处理到结果读取只需20分钟。
2、灵敏度高,较低浓度可达到10拷贝每微升。
3、特异性强,能将新冠与其他冠状病毒区分开,避免假阳性。
目前市面上的核酸检测仍是传统的荧光定量PCR方法,需要采取病毒提取、反转录、荧光定量扩增等多重操作,总体时间需要3小时以上。且,病毒提取方法需要多步骤处理样品,操作复杂,检测人员被染上的风险高。
该病毒可接触传播,飞沫传播,更可怕还可通过气溶胶传播,一旦足够浓度病毒暴露在空气中,就有可能造成人员污染。所以,我们认为国家急需一种能尽量减少检测人员对样品的接触操作,分子扩增快速,避免样品长时间暴露在空气中的新方法。
对此,团队不仅设计上述快速检测试剂,还开发出“超快速一步法传疾病样本处理方案”。该方案是集“样本保存”、“咽拭子采集”和“核酸释放”一体的快速样本前处理试剂,非常适合传疾病的样本采集,运输以及核酸提取。。
检测前仅需将装有待测样本液(浸泡过病毒样本的试剂液)的试管在沸水中浸泡10分钟,则进一步灭活病毒样本的同时,完成了待测前的处理。不仅进一步保护了检测人员,且无需依赖任何核酸提取设备。保证了全部检测流程仅需30分钟不到。
安普未来的解决方案操作十分简单
1核酸提取
直接取咽拭子等样品放入管A中(含裂解液,可灭活病毒);
管A放入95℃-100℃水浴或者金属浴10分钟;2扩增反应
向含有冻干试剂(冻干试剂包含了生物酶与各反应组分;可常温运输,便捷)的反应管中加入42.5 μL R buffer使其复溶;
取核酸提取步骤中提取完成的样本3-5μL 加入反应管;
然后在反应管加入2.5μL启动B buffer,盖上盖充分混匀后上机反应。反应温度为42℃,时长20min,实时显示荧光扩增曲线。其结果分析与荧光定量PCR类似,简单易懂。
什么样的分子检测技术才是高***的,且又能怎样帮到畜牧养殖企业呢?
“首先”分子检测的很大优势是可以将动物病害的预防大幅度提前。现在较为普及的检测法,是在牲口已有较为明显的发病征兆时,利用其本身产生的蛋白才能检测出来。所以属于中晚期预防技术。而,分子扩增技术是将潜伏在牲口体内或周边的微量病毒,在体外进行繁殖扩增,进而直接检测病毒本身。因此属于早中期检测技术。
恒温快速扩增试剂盒操作步骤
提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1) 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2) 每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3) 向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4) 然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5) 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins;
6) 反应结束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中,混合均匀后,将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡,5 mins内观察质控线与检测线判读结果。
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