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如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。

RPA技术犀利在何处

常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的温度在37°C - 42°C之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。

据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。

TwistDx试剂盒

先说结论:目前的检测仍重度依赖核酸检测(以PCR技术为主)，检测速度较慢(大  部分需要2小时以上)，成本较高，且需要经训练的医护或实验人员来操控设备，因此无法实  现大规模快速检测。其他已商业化的快速检测试剂盒绝大多数依靠检测(IgG/lgM),可在10-  20分钟内获取检测结果，成本较低，操作简单，但是准确性较差，有较大的概率出现假阳性与假阴  性的情况，因此仅适用于大量地区粗略统计人数以及比例，或作为核酸检测的辅助指  标，其检测结果无法作为确定检测者与否的决定性指标，而目前能实现快速检测(10-20分  钟)且确保准确性的方法之一抗原检测，尚未有成熟的产品面世，仅有少数科技公司宣称近完成了产品开发。此外，基于CRISPR的检测技术的试剂盒可以为认为是核酸检测技术与检测  技术的一个折中，准确性高，速度较快，成本较低且操作简单，但由于技术相对新  颖，只有少数公司与研究机构完成了试剂盒的开发，产品尚未大规模推广。

体外核酸扩增（NAA），遗传物质的人工，已经渗透到生命科学和生物技术的所有领域，如病原体检测、研究、、测序、基因工程、合成生物学、基因分型、诱变、法医鉴定、发现、分子考古学、食品检测、健康和生活方式检测等。这场性革命始于 Kary Mullis 于 1983 年发明的聚合酶链反应 (PCR)。通过提供有利于核酸过程（链变性、引物退火和酶促延伸）的连续温度，在体外将单个核酸分子到数十亿个拷贝。