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发布时间:2022-03-18 11:51:00 作者:立博泰业
恒温扩增技术
应用领域:广泛应用于临床诊断,食品安全检测,动物疾病检测等领域
技术特点:快速,特异,无需专门设备
类型:取代PCR的恒温核酸扩增技术,目前有应用前景的就是RPA技术,此外也有一些其他恒温扩增技术,主要包括:
1. 滚环核酸扩增( rolling circle amolification,RCA )
2.环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification,LAMP)
3.链替代扩增
4.依赖核酸序列扩增( nucleicacid sequence based amplification ,NASBA)
5.解链酶扩增( helix dependent amplification, HAD)
RPA技术
01 特别快,传统PCR要45分钟,因为要反复升温降温。RPA由于是恒温,所以只需要3-10分钟。
02 灵敏度高,因为是高度定向扩增,所以样品即便有点儿杂质也OK,免除了前处理环节,尽量多的保留了样本。
03 温度控制要求低,一般是加热到40℃,但是在紧急情况下,贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃,也是可以运行,就是慢点儿,要等一个小时而已。
04 适用性强,面对RNA病毒,直接在试剂里加入逆转录酶就好,一锅端。
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RPA 作为颠覆 PCR 的革命性方法的突出地位源于其特定的反应成分(表 1)和机制。 对于成功的 RPA 分析,细微差别取决于内在因素、引物、探针和核酸模板的设计; 并且与外在因素有关,如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板DNA。 此外,RPA 过程中的核酸标记、RPA 扩增子纯化和扩增后处理也是 RPA 检测成功的重要细节。 本节提供从 RPA 文献中总结的这些实用信息,作为 RPA 检测设计的指南。
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