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TwistDx恒温扩增应用

TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增（RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。

RPA反应的适宜温度在37℃~42℃之间，无需变性，常温下即可反应，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可检出水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。无需复杂样品处理，即可实地检测；既可扩增DNA也可扩增RNA，省去额外的cDNA合成步骤；检测方式多样：终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条（LFD）读取结果。

试剂盒包括两类：①.TwistAmp冻干研发试剂盒（包括TwistAmp Basic试剂盒、TwistAmp exo 试剂盒和TwistAmp nfo 试剂盒共三种）；②. TwistAmp液态研发试剂盒（包括TwistAmp Liquid Basic 试剂盒和TwistAmp Liquid exo 试剂盒共两种）

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如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。

TwistDx试剂盒

自 1983 年出现经典聚合酶链反应 (PCR) 方法以来，核酸扩增已渗透到生命科学的各个领域。 然而，尽管具有基本的影响，但 PCR 已被限制在实验室的范围内，因为它需要一套复杂的热循环系统，其限制了在资源匮乏环境中的外部应用。新的等温扩增策略正在寻求通过在恒温下提供核酸来突破传统的实验室限制。在这些方法中，重组酶聚合酶扩增 (RPA) 是发展快的方法之一，尽管它的开始相对较晚，但是却经历了快速的普及和市场化。

我们通过对已发表文献的数据挖掘总结了关键的 RPA 实验技巧和问题，以帮助研究人员掌握 RPA 反应。我们还概述了 RPA 发展的有影响力的热点，并总结了对未来发展的展望以及对超过PCR和进一步革新生命科学的影响。

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