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如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。

RPA技术

01  特别快，传统PCR要45分钟，因为要反复升温降温。RPA由于是恒温，所以只需要3-10分钟。

02  灵敏度高，因为是高度定向扩增，所以样品即便有点儿杂质也OK，免除了前处理环节，尽量多的保留了样本。

03  温度控制要求低，一般是加热到40℃，但是在紧急情况下，贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃，也是可以运行，就是慢点儿，要等一个小时而已。

04  适用性强，面对RNA病毒，直接在试剂里加入逆转录酶就好，一锅端。

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TwistDx试剂盒

增加分子数量使核酸的处理和后续应用更容易，减少了使用有毒性探针来跟踪分子存在的需求，并在应用方面产生了巨大的创造力。然而，尽管PCR很有价值 ，但是其需要复杂的热循环仪来提供循环加热和冷却过程，这在很大程度上限制了 PCR 在实验室内的实现，阻碍了其在资源匮乏环境中的应用。

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